dqTACT法：コロナウィルスへの細胞性免疫評価

血清抗体などの液性免疫が主体だったが、今後、細胞性免疫評価が多く行われるようになるのかもしれないとのこと‎

解説記事

少量の血液を24時間かけて採取するだけで、コロナウイルスの初感染あるいは反復感染に対するあなたの免疫システムの強さがわかるかもしれません。

科学者たちは、全血を採取して、T細胞反応（抗体レベルが低下した後も長く続く重要な免疫の構成要素）を間接的に測定する検査法を開発した。

この検査は、現在、正式な実験室で行われているものを模倣しているが、いくつかの複雑な手順や実験担当者の専門的な訓練を省くことができる。研究者によれば、この検査はより速く、より多くの人を検査できるように拡張でき、将来出現するウイルスの突然変異を検出できるようにすることも可能だという。こうした仕組みを説明する研究は、『Nature Biotechnology』誌のオンライン版で6月13日に発表された。

dqTACTと呼ばれるこの検査は、ワクチンを接種している人の「ブレークスルー」感染の可能性を予測するのに役立ち、免疫不全の人がどれくらいの頻度で再接種が必要かを判断するのに役立つだろうと著者らは指摘している。コロナウイルスやその他のウイルスに感染すると、免疫系がワンツーパンチを食らわせる。つまり、迅速な抗体反応の後に、ウイルスを「記憶」するT細胞を含むより長期の細胞性免疫が続くのである。細胞性免疫は、同じウイルスが再び出現した場合、迅速な反応を引き起こすことができる。この新しい検査では、コロナウイルスの合成ペプチド（タンパク質を構成するアミノ酸の列）を血液サンプルに添加する。24時間以内にT細胞の反応がなければ陰性である。もし、ペプチドがT細胞を誘発すれば、この検査は免疫反応の強さを測定することができる。研究者たちは、91人のうち約半数はCOVID-19に感染したことがなく、もう半数は感染して回復した人たちで、この新しいテストを従来の検査室でのテストと比較検証した。その結果はよく一致した。また、このテストはCOVID-19ワクチンの2回目の接種後8カ月までの免疫力を予測できることもわかった。さらに、ワクチンを2回接種した人は、1回しか接種していない人に比べてT細胞反応が大きかった。研究は現在進行中であり、将来FDAから認可される際の認可要件を満たすように設計されています。

Blood Test Aims to Measure COVID Immunity (medscape.com)

SARS-CoV-2に対する防御免疫応答のレベルと持続時間を測定するための高速でハイスループットな方法は、画期的な感染のリスクを予測するために必要です。ここでは、SARS-CoV-2特異的T細胞活性化のための2つの定量PCRアッセイの開発を報告する。アッセイは迅速で、内部的に正規化され、プローブベースです:qTACTはRNA抽出を必要とし、dqTACTはサンプル調製ステップを回避します。どちらのアッセイも、その発現が抗原特異的T細胞の活性化と強く相関するケモカインである‎‎CXCL10‎‎メッセンジャーRNAの定量に依存している。SARS-CoV-2ウイルス抗原による全血球の再刺激では、ウイルス特異的T細胞はIFN-γを分泌し、単球を刺激して‎‎CXCL10‎‎を産生する。したがって‎‎、CXCL10‎‎ mRNAは、細胞性免疫を定量するためのプロキシとして役立つことができる。我々のアッセイは、SARS-CoV-2に対する機能的T細胞免疫の大きさと持続期間の大規模なモニタリングを可能にし、脆弱な集団における再ワクチン接種戦略の優先順位付けに役立つ可能性がある。‎

Rapid, scalable assessment of SARS-CoV-2 cellular immunity by whole-blood PCR

Megan Schwarz, Denis Torre, …Ernesto Guccione 

nature biotechnology 　Published: 13 June 2022

https://www.nature.com/articles/s41587-022-01347-6

a, T細胞活性化アッセイのワークフロー概略図。すべてのアッセイは、全血採取から始まり、DMSO、ヌクレオカプシド（NP）、またはSpGペプチドプールで一晩刺激する。次に、上清を ELLA または Olink で回収し、RNA を抽出してプローブベースの qPCR（qTACT）または次世代シーケンサー（TACTseq）に使用するか、全血を希釈して直接 qPCR（dqTACT）に使用します。b, 全血のスパイクペプチドプール活性化に反応して CXCL10 がアップレギュレートされる。スパイクペプチドプール対DMSOで刺激された差次的発現遺伝子を、参加者のCOVID-19またはワクチン接種の状態によってグループ化し、赤（発現増加）または青（発現減少）として表示したボルケーノプロット。有意に差次的に発現した遺伝子は、調整P値<0.05および｜log2FC｜>1を有するものとして定義された。P値はDESeq2（両側）を用いて計算し、Benjamini-Hochberg法を用いて調整した。 c, CXCL10とIFNG mRNA誘導は相関する。サンプルにわたるIFNG発現に対する各遺伝子の相関（x軸）、及びスパイクペプチドプール対DMSOの対応するlog2FC（DESeq2により算出）を、COVID-19又はワクチン接種の状態によりグループ化して表示する散布図。d、DMSO対照サンプルと比較したスパイクペプチド刺激サンプルについて、回復期およびワクチン接種期参加者における有意に上昇した遺伝子の重複を表示したベン図。e, COVID-19回復者及びワクチン接種者コホートにおいて、DMSO対照サンプルと比較したスパイクペプチド刺激サンプルで発現した遺伝子のうち、IFN-γ応答遺伝子について有意に正の濃縮を示すGSEAプロット。